الجامع لكل تحاليل الميكروبيولوجي(الجزءالثانى)

طريقة أخذ العينة:

• أن تكون العينة من وسط البول و ذلك حتى لا تحتوي على إفرازات من مجرى البول.
• أن يراعى التنبيه على المريض و خصوصا السيدات بغسل الأعضاء التناسلية الخارجية جيدا بالماء و الصابون.
• يجب أن تفحص العينة خلال 3 ساعات من جمعها حيث أن تكاثر و نمو البكتيريا مما يودي إلى خلل في النتائج الكيميائية مثل نقص الجلوكوز و خلافه.

طريقة الزرع:

1) يتم تسجيل العينة و وضع البيانات في الملف الخاص بالزرع.
2) يتم تسجيل رقم العينة الخاص بالمختبر على الطبق
3) يتم خلط العينة بهدوء لتوزيع أي راسب يكون في قاع العينة.
4) يتم الزرع بأخذ نقطة أو نقطتين من البول و يتم وضعها داخل طبق الزرع
5) يتم توزيع نقطة البول في الطبق باستخدام الإبرة حسب ميكانيكية معينة.
6) توضع الأطباق في الحاضنة عند درجة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.

عينات البراز :

البكتيريا المحتمل و جودها في عينة البراز:
• السالمونيلا و الشيجيلا
• الكوليرا
• المكورات العنقودية الذهبية staph.aureus
• الإيشريشيا كولاي
• البروتيص

البيئات المستخدمة في على وجه العموم فهي كما يلي:

S.S agar :
تستخدم للعينات البرازية و هي بيئة انتخابية حيث أن هذه البيئة تثبط نمو البكتيريا الموجبة للجرام و كذلك تحتوي
على مثبطات نمو البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز.
فبنسبة للسالونيلا في XLD فلونها زهري و المركز توجد نقطة سوداء
أما في الشيجيلا فلونها زهري و بدون مركز اسود اللون السائد زهري

EMB :
بيئة تفريقية لعزل البكتيريا المعوية السالبة للجرام مثل: سالمونيلا, بروتيص, شيجيلا حيث تحتوي هذه البيئة على دليلين هما Eosine وMethylene blue الذين يفرقان بين البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز و غير المخمرة

DCA :
تحوي سكر اللاكتوز لذلك تفرق بين المخمرة و غير المخمرة لونها احمر فاتح يقترب من البني في حالة التخمر يتحول لونها إلى الأحمر الباهت.
حيث السالمونيلا لا لون لها و في المركز نقطة سوداء
أما الشيجيلا فهي بدون لون

S.B) Selenite broth
و هي بيئة سائلة غنية لنمو السالمونيلا بأنواعها :

المســحـــاتSWABS
البيئات المستخدمة في عينة المسحة:
Blood Agar*
*Sabouraud Agar
Macconkey Agar*
* Chocolate Agar
أما البكتيريا المتوقع نموها فهي كالتالي و ذلك حسب المنطقة المعزولة منها:
1-Beta.Hameolytic Streptococci.
2-Corynebacterium Diphtheriae.
3-Bordetella Pertussis.
4-Meningococci.
5-Staph Aureus.
6-Haemophills Influenzae.
7-Candida albicans.

أنواع المسحات:
1) مسحة من الزور أو الحلق في حالة الدفتيريا – التهاب الزور تزرع على B.A لاحتمال وجود المكورات السبحية المذيبة للدم أو العنقودية الذهبي تزرع على MAC عينات سلبية للجرام
2) مسحة من الجروح و الدمامل و الناسور
3) مسحة من الشرج في الأطفال في حالة الدوسنتريا
4) مسحة من الشرج في حالات الوفاة كما في الكوليرا
5) مسحة من التقيحات التي بالأذن، الأنف، العيون
تزرع على BA لا هوائي و هوائي و أيضا MAC
6) مسحة من الرحم كما في حالة السيلان- حمى النفاس
تزرع على BA+CO2 لاحتمال وجود مكورات سبحية مذيبة للدم
تزرع على MAC لاحتمال وجود العصيات سلبية جرام (بكتيريا القولون)

البيئات المستخدمة في عينة المسحة:
نستعمل Blood Agar و Macconkey Agar فقط
أما في حالة مسحة من الرحم أو العين فنستعمل Blood Agar و Chocolate Agar

التعرف على البكتيريا :

الفحص الميكروسكوبي عن طريق صبغ العينة:

أهمية الصبغة:
1. رؤية البكتيريا و التعرف عليها.
2. بعض أنواع الصبغات تستخدم في التفرقة بين أنواع البكتيريا مثل صبغة جرام التي تفرق بين الإيجابية و السلبية
و صبغة زيل نلسن تصبغ البكتيريا المقاومة للأحماض.

أنواع الصبغات:

**صبغات بسيطة :
• methylene blue stain
• صبغة كاربول فوكسين

**صبغات مركبة :
و هي الصبغات التي تستخدم فيها أكثر من صبغة أولية و منها
• صبغة جرام
و هي تتكون من صبغة الميثيل فيولت Methyl violet و كذلك صبغة اليود Lugol's iodine
• صبغة الزيل نلسن:
تستخدم هذه الصبغة لصبغ البكتيريا المقاومة للأحماض (Acid –Fast) مثل الميكوبكتيريا و ذلك لاحتواء هذه البكتيريا على مواد شمعية لذلك يلزم استخدام مثل هذه الصبغة مع التسخين.

و سوف نتحدث عن صبغة جرام و صبغة الزيل نلسن بشي من التفصيل في الصفحة القادمة

صبغة جرام :

• تحضير اللطخة البكتيرية باستخدام محلول ملحي
• غمر الشريحة بمحلول Crystal violet لمدة 30الى 60 ثانية
• غسل الشريحة بماء الحنفية الهادي
• غمر الشريحة بمحلول اليود لمدة 30الى 60 ثانية
• غسل الشريحة ثم اغمر في الكحول المطلق لمدة 60 ثانية
• غسل الشريحة جيدا ثم اغمر في صبغة Safranin لمدة 30 إلى 60 ثانية.
• غسل الشريحة ثم جففها
• فحصها

صبغة زيل نلسن :
• تحضير لطخة من البلغم الغليظ ( لاحتمال وجود عصيات السل بكمية اكبر) على شريحة زجاجية مع التثبيت بواسطة اللهب.
• غمر الشريحة بصبغة الكاربول فوكسين مع التسخين حتى يتصاعد البخار و ظهور لون ذهبي ننتظر لمدة 3-4 دقائق.
• غسل الشريحة بماء الحنفية الهادي.
• غمر الشريحة في أسيد الكحول لمدة 5 دقائق حتى تصبح اللطخة لونها زهري فاتح ( لإزالة الصبغة من البكتريا).
• غسل الشريحة بماء الحنفية الهادي.
• غمر الشريحة بصبغة المثيلين بلو من 2-3 دقائق.
• اغسل الشريحة بماء الحنفية الهادي
• أجففها بواسطة ورق ترشيح
• و من ثم الفحص

ملاحـظـه:
• يستحسن استخدام ماء مقطر في عملية الغسيل حيث توجد أنواع من البكتيريا المقاومة للأحماض في مياه الصنبور
• البعض يستخدم أنية خاصة لصبغ عدد من الأفلام مرة واحدة و هذا خطاء فربما انتقلت البكتيريا المقاومة للأحماض من عينه ايجابية إلى أخرى سلبية فيجب الصبغ كل شريحة على حده
• يجب عمل شريحتين لكل عينة و فحص كل شريحة لمدة 20 – 30 دقيقة لأنه إذا وجد في الفلم كله عدد 1 عصية سل يدل على أن الميكروب يوجد بنسبة 000, 10 مكبرة لكل 1سنتيمتر مكعب في عينة البلغم
فحص البيئات و التعرف على المستعمرات

• وصف المستعمرة:
الحجم – الشكل – شفافة أو معتمة – جافه أو مخاطية – مسطحة أو مرتفعة – ذات حافة محددة أو مشرشرة
اللون حيث أن هناك نوعين فبعضها تعطي صبغة داخلية مثل المكورات العنقودية الذهبية و مستعمرة تعطي صبغة خارجية تنتشر في البيئة مثل عصيات الصديد الأزرق.

• التحلل الدموي في أطباق أجار الدم:
حيث هذه الخاصية تقسم المكونات السبحية إلى ثلاث أنواع:
- مكورات سبحية بيتا ------ تحلل كلي حول المستعمرة
- مكورات سبحية آلفا ------ تحلل جزئي حول المستعمرة
- مكورات سبحية جاما ----- لا تحلل الدم.

• مخمرة للاكتوز أو غير مخمرة:
في أطباق ماكونكي أجار:
حيث المخمرة تعطي اللون الوردي و الغير مخمره تعطي اللون الأصفر
في أطباق كليد أجار:
حيث المخمرة تعطي اللون الأخضر و الغير مخمرة تعطي اللون الأصفر

• أنواع البيئات المنماة عليها:
حيث أن كل ميكروب يفضل بيئة معينة لتنمو فيها و البعض لا ينمو في بيئات أخرى في وقت أنها مناسبة للميكروبات أخرى.
و بالتالي تعتبر خاصية للتفرقة بين أنواع الميكروب.

الاختبارات البيوكيميائية

1- اختبار الأكسيديز (ورقة ترشيح):
عندما تكون البكتيريا سالبة للاكتوز نقوم بهذا الاختبار
فإذا كانت النتيجة موجبة فالبكتيريا سيدومونص
و إذا سالبة فنعمل API
إذا اختبار الأكسيديز هو للتفرقة بين سيدومونص و البكتيريا الأخرى

2- اختبار الكتاليز (الشريحة والغاز):
عندما تكون البكتيريا موجبة اللاكتوز نقوم بهذا الاختبار
فإذا كانت النتيجة موجبة فهي ستاف و نتجة لعمل Dnase
و إذا سالبة فهي ستربتو و نعمل اختبار المجموعة

* هنا في هذا الاختبار لا يتم عمله إلا إذا حصل تحلل (ستناف, ستربتو)

3- اختبار nase :
هو اختبار يكون على بيئة Dnase و هي للتفرقة بين الستاف و الستربتو حيث يتم بإضافة HCL

4- اختبار API:
و بعد ذلك نقوم بعمل أقراص الحساسية حسب البكتيريا المكتشفة عندنا

يتبع ...